做实验的同行们，估计都遇到过液相色谱压力“闹脾气”的时候。压力曲线像过山车一样上蹿下跳，数据没法看，实验进度卡壳，心里那个急啊。今天咱们就来聊聊这个常见问题，从现象到原因，再到解决办法，一步步帮你理顺。

一、先看看压力不稳长什么样

压力不稳通常分两种：一种是压力有规律地周期性波动，另一种是压力毫无规律地乱跳。前者往往指向某个系统部件的问题，后者可能是多因素叠加。

直观的就是看实时压力曲线——正常的应该是一条平稳的直线，波动范围通常不超过设定压力的1%-2%。如果曲线开始“跳舞”，那就要开始排查了。

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二、常见原因逐个数

1. 流动相里的“小气泡”

这是常见的原因之一。流动相脱气不彻底，或者溶剂瓶里的溶剂快用完了，都容易引入气泡。

怎么判断？观察压力波动往往没有规律，同时伴随着基线噪声增大。如果是purge阀或在线脱气机工作异常导致脱气不足，压力波动可能更明显。

2. 泵的问题

单泵或二元泵的某一个泵头出问题，都会导致压力不稳。

单向阀故障：阀球被污染卡住，或者阀座磨损。这时压力往往会有规律的周期性波动，频率与泵的冲程一致。

柱塞杆或密封圈磨损：可能导致渗漏，压力上不去且波动。

比例阀或混合器问题（对二元泵而言）：会导致混合不均匀，压力波动。

3. 进样器漏液

进样针或针座磨损、转子密封圈损坏，都会导致微量渗漏。这种波动往往在进样时或进样后更明显。

4. 色谱柱“堵了”或“塌了”

柱头筛板堵塞、柱床内有空隙或塌陷，会导致流动不畅，压力异常升高且不稳。如果柱效明显下降，伴随峰形异常，要优先怀疑柱子。

5. 检测器流通池有气泡

流通池内有微小气泡通过，会造成压力波动和基线噪声。通常观察检测器信号会更明显。

6. 管路连接处微渗漏

特别是高压部分的接头，哪怕极微小的渗漏，也会导致压力不稳。有时渗漏很慢，肉眼看不到液滴，但压力已经受影响。

表1.HPLC压力不稳常见原因表

三、一步步排查，快速定位问题

第一步：简化系统

卸下色谱柱，换上两通（union）连接管路，观察压力。如果压力平稳，问题很可能在色谱柱；如果不稳，问题在柱前系统（泵、进样器、管路等）。

第二步：分段检查

检查流动相：是否新鲜配制、充分脱气？换个新配的流动相试试。

检查溶剂瓶：液位是否足够？吸滤头是否堵塞？输液管里有没有连续的气泡？

检查泵：运行每个泵单独purge，听声音是否正常，观察出口液流是否连续。如果有条件，可以测试每个泵的流量准确性。

检查进样器：多次进样空白，观察压力波动是否与进样动作相关。

检查管路接头：用纸巾仔细擦拭每个接头，看是否有湿润痕迹。

第三步：关注细节

室温是否稳定？温度波动大会影响流动相粘度，进而影响压力。

近是否更换过流动相？不同溶剂的粘度、可压缩性不同，压力会有变化，这可能是正常的。

仪器是否长时间未用？可能是密封圈干缩导致微渗漏。

表2.HPLC压力不稳系统排查步骤表

四、针对性解决办法

对气泡问题：

充分脱气：超声、抽滤、通惰性气体（如氦气），并用好在线脱气机。

保持溶剂瓶液位，及时添加。

适当提高系统压力（如加个背压管），减少气泡形成。

对泵问题：

清洗单向阀：拆下用异丙醇超声清洗，或者用专用工具冲洗。

更换密封圈：这是常规耗材，按使用时长定期更换。

联系工程师：如果是比例阀、混合器或泵头其他问题，可能需要专业维修。

对进样器问题：

清洗或更换进样针、针座。

更换转子密封圈（通常建议定期更换）。

对色谱柱问题：

尝试反向冲洗柱子（注意柱子是否允许）。

更换柱头筛板或修剪柱头（有一定风险，需谨慎）。

如果柱效严重下降，考虑更换新柱。

对漏液问题：

重新拧紧接头（不要过度用力，以免损坏）。

更换损坏的管路、接头或密封件。

五、养成良好的习惯，预防为主

流动相要干净：用HPLC级溶剂，水要用超纯水，流动相过滤、脱气不能省。

仪器要爱惜：避免突然的压力变化，更换流动相时要缓和过渡。

耗材定期换：密封圈、针座、滤头等，按厂家建议或实际使用情况定期更换。

柱子好好用：样品要干净，用保护柱，避免突然的高流速冲击。

用完好好收：长时间不用，要按规程清洗、保存系统。

表3.HPLC压力不稳预防措施表

液相色谱压力不稳是个“综合征”，可能原因很多，但只要有条理地排查，大多数问题都能解决。平时多观察仪器状态，做个实验记录，时间长了，你一听声音、一看曲线，大概就能猜到问题在哪。实验不易，且做且珍惜。希望这些经验能帮你少走点弯路，实验顺利，数据漂亮！

常见问题(FAQ)

Q1：压力波动总是发生在实验开始后半小时左右，可能是什么原因？

这个问题很可能与温度平衡有关。实验室环境温度或柱温箱温度未充分稳定时，流动相和色谱柱的温度会持续变化，导致粘度变化，从而引起压力漂移或波动。特别是使用乙腈-水体系时，混合过程会吸热，温度影响更明显。

解决办法：

实验前，提前打开柱温箱，让色谱柱在设定温度下平衡至少30分钟。同时，让流动相以较小流速（如0.2-0.5 mL/min）在系统中循环10-15分钟，使整个流路温度达到平衡，再进行正式分析。此外，检查实验室空调出风口是否直接对着仪器，避免局部温度波动。

Q2：压力突然降到零，然后又恢复正常，偶尔发生，怎么回事？

这种“断崖式”下跌然后恢复，常见的原因是泵头或管路中存有微小气泡。气泡进入高压泵头后，在压缩瞬间无法形成有效压力，导致压力骤降；当气泡被排出后，压力又恢复正常。也可能与单向阀阀球偶尔卡住有关。

解决办法：

首先，对流动相进行充分脱气，并确保溶剂瓶吸滤头完全浸入液面下，无气泡吸入。其次，以较高流速（如3-5 mL/min）进行泵的Purge操作（不接色谱柱），持续5-10分钟，可有效排出泵头内的残留气泡。如果问题仍偶尔出现，可尝试用异丙醇低流速冲洗系统，或对单向阀进行清洗。

Q3：换了一根新色谱柱后压力变得不稳，而旧柱子没问题，是柱子坏了吗？

不一定。这种情况很可能是新色谱柱与系统连接处存在死体积或微渗漏。新柱子的接口螺帽或卡套可能因公差或安装手法问题，未能与系统管路形成完美的零死体积连接，导致微小空隙，引起压力波动和谱峰展宽。

解决办法：

首先，重新安装色谱柱：将柱子入口端接头小心拧开，剪掉管路前端一小截（确保切口平整），按照正确手法（先手动旋紧，再用扳手旋转1/4-1/2圈）重新拧紧。然后，用两通代替柱子连接系统，观察压力是否平稳，以确认问题是否在柱子接口。如果重新安装后问题依旧，再联系供应商排查柱子本身的可能性（如柱床填充问题）。

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